与DNA提取有关的那些事

  染色体DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA、质粒DNA、病毒/噬菌体DNA等。注：具体操作可拜见《派森诺样品制备及质量开展要求》文件，可向当地出售或技能-支撑讨取。现在提取DNA的办法繁复，如CTAB法、SDS法、各种试剂盒等，但原理大致相同，主要是裂解和纯化两大过程。首要对样品破壁裂解，选用机械力、化学试剂、酶等办法将DNA开释开来，随后去除蛋白质、糖、酚、金属离子等杂质，再用无水乙醇、异丙醇沉积或载体吸附DNA，之后洗刷溶解即可得到核酸。尽管原理类似，但不同提取办法运用的试剂有很大不同，下面罗列出在提取过程中，常用试剂的作用及原理：

  （1）CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）:一种阳离子外表活性剂，在高盐溶液中，CTAB可与蛋白质和中性多糖构成复合物而沉积，但不能沉积核酸和酸性多糖，别的它还能维护DNA不受内源核酸酶的降解。（2）SDS（十二烷基硫酸钠）:一种阴离子去污剂，可使细胞膜崩解，与膜蛋白疏水部分结兼并使其与膜别离，使蛋白变性。（3）PVP(聚乙烯吡咯烷酮):是酚类化合物的螯合剂，可与多酚化合物构成复合体，使其不被氧化成醌类。（4）β-巯基乙醇：抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，防止褐变，使酚简略去除。（5）蛋白酶K：用于生物样品中蛋白质的一般降解，将蛋白质降解成小分子肽或氨基酸，使DNA分子别离出来。2.纯化相关试剂耗材（1）苯酚：使蛋白质变性，一起按捺了DNase的降解作用。（2）氯-仿：战胜酚的缺陷，加快有机相与液相分层，去除核酸溶液中的迹量酚（酚易溶于氯-仿中）。（3）异戊醇：少量异戊醇可以大大削减蛋白质变性操作的流程中产生的气泡，有助于分相，坚持系统的安稳。（4）无水乙醇：沉积DNA，不易沉积盐类等物质；异丙醇也可沉积DNA，体积小时刻短，但易沉积盐类物质。（5）核酸纯化柱：选用硅胶膜作为核酸的特异性吸附资料（高盐低pH值结合核酸），一起去除其他杂质，可以最-大程度地收回样品中的DNA（低盐高pH值洗脱），可以适用于各物种的DNA提取。简略易操作、用时短、纯度高。（6）DNA提取磁珠：是一种中心为四氧化三铁、外表润饰很多硅羟基的磁性微球，能在高盐、低pH条件下和溶液中的核酸经过疏水作用、氢键作用和静电作用等产生特异性结合，而不与其它杂质（如蛋白）结合，可敏捷从生物样品中别离核酸，操作安全简略，十分有利于核酸的自动化和高通量提取。五. 核酸的保存短时刻（24h内）可放置4℃保存，长时刻（24h以上）放置于-20℃进行保存，期间防止重复冻融。关于纯度不高、总量较少、完好度欠好的非高质量核酸，还需尽早进行后续试验，以防保存时刻过长，DNA质量更受影响，从而影响建库和测序质量。以上为我们罗列了在提取过程中常常用到的试剂及原理，给出了核酸保存的主张。要着重的是相同的原理下，不是试剂的去污、裂解作用越好就用的越多，仍是要在实践提取过程中，依据提取资料的不同、提取成果的差异，灵敏调整试验计划。