试剂盒
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豚鼠白细胞分化抗原CD30(CD30)ELISA试剂盒

发布日期: 2024-01-30 16:01:41 来源:ELISA试剂盒



  操作过程:1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩下板条用自封袋密封放回 4℃。2. 设置品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;品孔各加不同浓度的品 50μL;3. 待测样本孔先加待测样本 10μL,再加样本稀释液 40μL;4. 随后品孔和样本孔中(空白孔不加)参加辣根过氧化物酶(HRP)符号的检测 50μL,用封板膜封住反响孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。5. 弃去,吸水纸上拍干,每孔加满洗刷液,静置 1min,甩去洗刷液,吸水纸上拍干,如此重复洗 板 5 次(也可用洗板机洗板)。6. 一切孔参加底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。7. 一切孔参加停止液 50μL,15min 内,在 450nm 波利益测定各孔的 OD 值。

  成果判别: 制作曲线:在Excel作业表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,制作出品线性回归曲线,按曲线方程核算各样本浓度值。

  试验开端前,请提早装备好一切试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽可能的防止起泡。每次检测都应该做曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品契合试剂盒的检测规模。

  1.加样:别离设空白孔、孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔别离加品或待测样品100μl,留意别有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反响120分钟。 为试验成果有效性,每次试验请运用新的品溶液。

  2.弃去,甩干,不必洗刷。每孔加生物素符号作业液 100μl(取1μl生物素符号加99μl生物素符号稀释液的份额制造,悄悄混匀,在运用小时内制造),37℃,60分钟。

  3.温育60分钟后,弃去孔内,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

  4.每孔加辣根过氧化物酶符号亲和素作业液(同生物素符号作业液) 100μl,37℃,60分钟。

  5.温育60分钟后,弃去孔内,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

  6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此刻可见品的前3-4孔有显着的梯度蓝色,后3-4孔梯度不显着,即可停止)。

  7.依序每孔加停止溶液50μl,停止反响(此刻蓝色立转)。停止液的参加次序应尽量与底物液的参加次序相同。为了试验成果的精确性,底物反响时间到后应赶快参加停止液。

  8.用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(OD值)。在加停止液后15分钟以内进行检测。

  :全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。

  :可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本收集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。

  :1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。 (注:标本溶血会影响**检测成果,因而溶血标本不宜进行此项检测。)

  :经过文献检索的了解待测样本的大致含量,确认恰当的稀释倍数。只要稀释至曲线的规模内,检测的成果才是精确的。稀释的中,应做好具体的记载。核算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。

  :2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后重复倒置/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,别离稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为浓度0 pg/ml,临用前15分钟内制造。 如制造150 pg/ml品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述品参加含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其他浓度以此类推。

  :临用前以生物素符号稀释液稀释,稀释前依据预先核算好的每次试验所需的总量制造(每孔100μl),实践制造时应多制造0.1-0.2ml。如10μl生物素符号加990μl生物素符号稀释液的份额制造,悄悄混匀,在运用小时内制造。

  :临用前以辣根过氧化物酶符号亲和素稀释液稀释,稀释前依据预先核算好的每次试验所需的总量制造(每孔100μl),实践制造时应多制造0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶符号亲和素加990μl辣根过氧化物酶符号亲和素稀释液 的份额制造,悄悄混匀,在运用小时内装备

  双夹心:本法大多数都用在检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病(IBDV)的双夹心ELISA为例介绍本法的操作程序。① 加包被 → 4℃过夜,洗刷三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗刷三次、抛干③ 加酶标 → 37℃ 30分钟,洗刷三次、抛干④ 加底物液→ 37℃ 15分钟,加停止液⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

  以物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(一般坐标),在半对数坐标纸上绘出曲线,依据样品的OD值由曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用物的浓度与OD值核算出曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,核算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实践浓度。

  制作曲线:在Excel作业表中,以品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,制作出品线性回归曲线,按曲线方程核算各样本浓度值。

  4.请每次测定的一起做曲线.如标本中待测含量过高,请先稀释后再测定,核算时请乘以稀释倍数。

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