试剂盒
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植物过氧化物酶(POD)ELISA试剂盒

发布日期: 2023-12-10 01:53:20 来源:ELISA试剂盒



  捕获抗体的包被微孔中,顺次参加标本、规范品、HRP符号的检测抗体,经过温育并完全洗刷。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的效果下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),核算样品浓度。

  1.本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、安排匀浆及相关液体样本中过氧化物酶(POD)的含量;

  1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。

  2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本搜集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。

  3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应防止重复冻融。 (注:标本溶血会影响**检测成果,因而溶血标本不宜进行此项检测。)

  标本的稀释准则:首要经过文献检索的办法了解待测样本的大致含量,确认恰当的稀释倍数。只要稀释至规范曲线的规模内,检测的成果才是精确的。稀释的进程中,应做好具体的记载。核算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。

  规范品的稀释准则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后重复倒置/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,别离稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为规范浓度0 pg/ml,临用前15分钟内制造。 如制造150 pg/ml规范品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述规范品参加含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其他浓度以此类推。

  生物素符号抗体的稀释准则:临用前以生物素符号抗体稀释液稀释,稀释前依据预先核算好的每次试验所需的总量制造(每孔100μl),实践制造时应多制造0.1-0.2ml。如10μl生物素符号抗体加990μl生物素符号抗体稀释液的份额制造,悄悄混匀,在运用前一小时内制造。

  辣根过氧化物酶符号亲和素的稀释准则:临用前以辣根过氧化物酶符号亲和素稀释液稀释,稀释前依据预先核算好的每次试验所需的总量制造(每孔100μl),实践制造时应多制造0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶符号亲和素加990μl辣根过氧化物酶符号亲和素稀释液 的份额制造,悄悄混匀,在运用前一小时内制造。

  试验开端前,请提早装备好一切试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽可能的防止起泡。每次检测都应该做规范曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品契合试剂盒的检测规模。

  1.加样:别离设空白孔、规范孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔别离加规范品或待测样品100μl,留意别有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反响120分钟。 为确保试验成果有效性,每次试验请运用新的规范品溶液。

  2.弃去液体,甩干,不必洗刷。每孔加生物素符号抗体工作液 100μl(取1μl生物素符号抗体加99μl生物素符号抗体稀释液的份额制造,悄悄混匀,在运用前一小时内制造),37℃,60分钟。

  3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

  4.每孔加辣根过氧化物酶符号亲和素工作液(同生物素符号抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。

  5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。

  6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此刻肉眼可见规范品的前3-4孔有显着的梯度蓝色,后3-4孔梯度不显着,即可停止)。

  7.依序每孔加停止溶液50μl,停止反响(此刻蓝色立转黄色)。停止液的参加次序应尽量与底物液的参加次序相同。为了可以更好的确保试验成果的精确性,底物反响时间到后应赶快参加停止液。

  8.用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(OD值)。 在加停止液后15分钟以内进行检测。

  1.用户在初度运用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂会集到管底。

  2.每次试验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,仅仅**加底物溶液及2N H2SO4。丈量时先用此孔调OD值至零。

  3.为防止样品蒸腾,试验时将反响板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。

  4.未运用完的酶标板或许试剂,请于2-8℃保存。规范品、生物素符号抗体工作液、辣根过氧化物酶符号亲和素工作液请依据所需的量装备运用。请勿重复运用已稀释过的规范品、生物素符号抗体工作液或、辣根过氧化物酶符号亲和素工作液。

  手艺洗板办法:吸去(不行触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在试验台上衬托几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几回;将引荐的洗刷缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。依据本身的需求,重复此进程数次。

  以规范物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(一般坐标),在半对数坐标纸上绘出规范曲线,依据样品的OD值由规范曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用规范物的浓度与OD值核算出规范曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,核算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实践浓度。

  4.请每次测定的一起做规范曲线.如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,核算时请乘以稀释倍数。

  搜集标本前有必要清楚要检测的成份是否满足安稳。对搜集后当天进行细心的检测的标本,储存在4 ℃备用,如有特别原因要周期搜集标本, 将标本及时分装后放在-20 ℃或-70 ℃条件下保存。防止重复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时,-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需增加抑肽酶。

  以规范物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出规范曲线,依据样品的OD值由规范曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用规范物的浓度与OD值核算出规范曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,核算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实践浓度。